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CREATINE KINASE-MB
CREATINA QUINASA-MB (CK-MB)
Reactivos para medir la concentración de CK-MB Sólo para uso in vitro en el laboratorio clínico FUNDAMENTO DEL MÉTODO
CONTROL DE CALIDAD
Un anticuerpo específico inhibe las dos subunidades M de la CK-MM (CK-3) y la única Se recomienda el uso del Suero Control de CK-MB (cod. 18024) para verificar la funcionalidad subunidad M de la CK-MB (CK-2), lo que permite la medición de la subunidad B de la de la CK- del procedimiento de medida. Reconstituir el suero con 0,5 mL de agua destilada. Agitar MB (asumiendo la ausencia de CK-BB o CK-1)1,2. La concentración catalítica de CK-B, que suavemente el vial, procurando evitar la formación de espuma, hasta disolver por completo todo corresponde a la mitad de la actividad CK-MB, se determina empleando las reacciones el liofilizado. Utilizar el Control en el procedimiento analítico de forma idéntica a los sueros de acopladas de la hexoquinasa (HK) y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6P-DH), a partir de la velocidad de formación del NADPH, medido a 340 nm3. Las concentraciones de CK y CK-MB vienen indicadas en la etiqueta del vial. El valor de CK es trazable al sistema de referencia descrito por el Comité de Sistemas de Referencia para Enzimas de IFCC y el de CK-MB al material de referència ERM-AD455 (IRMM). La trazabilidad solo se asegura empleando los reactivos y procedimientos de medida recomendados por Los intervalos de valores aceptables que se sugieren han sido elaborados en base a la COMPOSICIÓN
experiencia previa en variabilidad interlaboratorio y se indican únicamente a título orientativo, ya que cada laboratorio debe establecer sus propios parámetros de precisión. A. Reactivo. 1 x 40 mL: Anti-humano-CK-M capaz de inhibir 2000 U/L de CK-M, Imidazol 125 mmol/L, EDTA 2 mmol/L, acetato de magnesio 12,5 mmol/L, D-glucosa 25 mmol/L, CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS
N-acetilcisteína 25 mmol/L, hexoquinasa 6800 U/L, NADP 2,4 mmol/L, pH 6,1.
− Límite de detección: 3 U/L = 50 nkat/L B. Reactivo. 1 x 10 mL: Fosfato de creatina 250 mmol/L, ADP 15,2 mmol/L, AMP 25 mmol/L, − Límite de linealidad: 600 U/L = 10002 nkat/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la P1, P5-di(adenosina-5'-)pentafosfato 103 µmol/L, glucosa-6-fosfato deshidrogenasa 8800 muestra 1/2 con agua destilada y repetir la medición. CONSERVACIÓN
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su uso. Indicaciones de deterioro: − Reactivos: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior a 0,400 a 340 PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Reactivo de Trabajo: Añadir el contenido de un frasco del Reactivo B a un frasco del Reactivo − Sensibilidad: 0,606 ∆mA⋅L/U⋅min = 10,10 ∆mA⋅L/nkat⋅min A. Mezclar suavemente. Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL − Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias sistemáticas significativas al ser comparados con reactivos de referencia. Los detalles del Estable 15 días a 2-8ºC. El reactivo de trabajo debe estar protegido de la luz. estudio comparativo están disponibles bajo solicitud. EQUIPO ADICIONAL
− Interferencias: La hemólisis (hemoglobina > 2,5 g/L) y la lipemia (triglicéridos >1,25 g/L) interfieren. La presencia en la muestra de concentraciones por encima de lo normal de − Analizador, espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a 37ºC para lecturas a CK-BB o de adenilato quinasa, y de macro-CK o CK mitocondrial interfieren5. La bilirrubina (< 20 mg/dL) no interfiere. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir6. Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar al MUESTRAS
cambiar de instrumento o realizar el procedimiento manualmente. Suero recogido mediante procedimientos estándar. CARACTERISTICAS DIAGNÓSTICAS
La concentración de CK total en la muestra debe ser inferior o igual a 1000 U/L. Si es superior, La creatina kinasa esta compuesta de 2 cadenas polipeptídicas, denominadas B (de cerebro) y diluir el suero 1/2 con NaCl 150 mmol/L. M (de músculo), que dan origen a los tres isoenzimas diméricos: MM (CK-1), MB (CK-2) y BB La CK-MB en suero es estable al menos 7 días a 2-8ºC. PROCEDIMIENTO
Los porcentajes de la actividad de CK-MB sérica respecto a la actividad CK total suele ser inferior al 6%. Sin embargo, estos valores aumentan al 10 a 30% después de un infarto de 1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a 37ºC. miocardio dependiendo de la extensión de tejido miocárdico afectado y de la localización del 2. Pipetear en un tubo de ensayo: (Nota 1) infarto. No obstante, pueden encontrarse índices bajos de CK-MB sérica tras un infarto de un miocardio previamente sano. Por consiguiente, el diagnóstico de infarto de miocardio debe basarse en la historia clínica y otros datos, junto con la magnitud de la elevación de CK-MB y su 3. Mezclar bien e incubar inmediatamente a 37ºC. Poner en marcha el cronómetro. El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, 4. Leer la absorbancia (A) a 340 nm exactamente a los 5 minutos (A5) y a los 10 minutos (A10) sino que debe integrar los datos clínicos y de laboratorio. CÁLCULOS
1. Estos reactivos pueden utilizarse en algúnos analizadores automáticos. Solicite información La concentración de CK-MB en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula: 2. Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs y para los anticuerpos anti-HCV y anti-HIV. Sin embargo, deben tratarse con precaución El coeficiente de absorción molar (ε) del NADPH a 340 nm es 6.300, el paso de luz (l) es 1 cm, BIBLIOGRAFÍA
el volumen total de reacción (Vt) es 1,04, el volumen de muestra (Vs) es 0,04, y 1 U/L equivale 1. Würzburg U, Hennrich N, Lang H, Prellwitz W, Neumeier D and Knedel M. Bestimmung der a 16,67 nkat/L. Se deducen los siguientes factores para calcular la concentración catalítica: aktivität von creatinkinase MB im serum unter verwendurng inhibierender antikörper. Klinische Wochenschrift 1976; 54: 357-360. 2. Gerhardt W and Waldenstrom G. Creatine kinase B-subunit activity in serum after immunoinhibition of M-subunit activity. Clin Chem 1979; 25: 1274-1279. El índice de CK-MB se calcula utilizando la siguiente fórmula: 3. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 7: IFCC method for creatine kinase. JIFCC 1989; 1: 130-139. 4. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB Saunders Co., VALORES DE REFERENCIA
5. Urdal P and Landaas S. Macro creatine kinase BB in serum, and some data on its Se han descrito valores discriminantes de alrededor de 25 U/L = 417 nkat/L para el infarto prevalence. Clin Chem 1979; 25: 461-465. agudo de miocardio. No obstante, es preferible emplear el límite del índice de CK-MB del 6% de 6. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997. la concentración de CK total4 como valor discriminante. 7. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, BioSystems S.A. Costa Brava 30, Barcelona (Spain) ISO 13485 - TÜV Rheinland - Reg.: SX 60010383 0001 ISO 9001 - TÜV CERT - Reg.: 01 100 6696

Source: http://www.biosimex.com.mx/pdf/insertos/QUIMICA%20CLINICA/11792c.pdf